灯盏花素是中药灯盏花的主要有效成分，具有抗炎、抗氧化等多种药理学作用^[1-3]。近年来，灯盏花素抗肿瘤作用逐渐得到了医药工作者的关注，已证实，灯盏花素对非小细胞肺癌、胰腺癌等具有抑制作用^[4-5]。顺铂为胃癌化疗的基础用药，但灯盏花素联合顺铂是否能够增强骨胃癌细胞对顺铂的敏感性、提高其疗效尚未见文献报道，本研究通过体外培养人胃癌BGC-823细胞并给予灯盏花素+顺铂联合干预，对比单用顺铂，研究灯盏花素对BGC-823细胞顺铂增敏作用。

1 材料与方法

1.1 细胞、药物与试剂  人胃癌BGC-823细胞株引自河北医科大学细胞生物研究室；灯盏花素（纯度≥95%）购自上海源叶公司；注射用顺铂购自山东齐鲁制药有限公司；DMEM 高糖培养基、胰蛋白酶、胎牛血清购自美国HyClone公司； Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒购自美国BD公司。

1.2 方法  

1.2.1 细胞培养、分组与给药  人胃癌BGC-823细胞株经复苏后植入DMEM高糖培养基进行培养并取对数生长期细胞进行下一步实验：0.25%胰酶消化、调整细胞浓度为5×10⁴/ml后分为空白对照组、灯盏花素（20μg/ml）组和顺铂（40μg/ml）组和联合组（灯盏花素20μg/ml+顺铂40μg/ml）；各组分别给予相应浓度药物进行干预，48h后行各指标检测。

1.2.2 各组BGC-823细胞细胞增值抑制率的测定  调整细胞浓度至5×10⁴/ml，接种于96孔板，每孔滴加20μl MTT溶液（5mg/ml），培养4h后去上清，加入DMSO 200μl，振荡10min后通过酶标仪测定波长570nm处吸光度（OD）值，计算各组细胞增值抑制率：细胞增殖抑制率（%）=[1-（实验组OD值-空白组OD值）/（对照组OD值-空白组OD值）]×100%

1.2.3 细胞凋亡状况的观察  各组细胞经PBS洗涤、加入70%乙醇5ml混匀并置4℃环境48h后离心取细胞，经PBS洗涤并打散细胞团后加5μl水解酶Rnase（10mg/ml），置37℃环境1h，加入碘化丙啶染液，避光孵育30min，然后通过流式细胞仪进行检测，采用CELL Quest软件分析各组细胞的细胞周期时相及凋亡状况。

1.3 统计学方法  运用软件SPSS15.0进行统计分析，组间均数比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验；P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组BGC-823细胞增殖抑制率  如表1所示：灯盏花素组、顺铂组和联合组BGC-823细胞增殖抑制率均显著高于空白对照组（P<0.05）；而联合组细胞增殖抑制率显著高于顺铂组（P<0.05）。

表1  各组BGC-823细胞增殖抑制率（）

注：与空白对照组比较：^*P<0.05；与顺铂组比较：^△P<0.05

2.2 各组BGC-823细胞凋亡  如表3所示：灯盏花素组、顺铂组和联合组BGC-823细胞AI较空白对照组均显著升高（P<0.05）；而联合组BGC-823细胞AI显著高于顺铂组（P<0.05）。

表3  各组BGC-823细胞AI（）

注：与空白对照组比较：^*P<0.05；与顺铂组比较：^△P<0.05

3 讨论

胃癌发病率和致死率均居肿瘤疾病谱前列，是临床上亟待解决的一个难题。临床上采用手术切除辅以放化疗的治疗方案，但80%的胃癌患者因确诊时体内已经出现转移病灶而致使手术治疗效果不佳。本研究发现，较单用顺铂组，灯盏花素+顺铂联合给药干预能够更加显著抑制人胃癌BGC-823细胞增殖并提高其凋亡率，提示灯盏花素能够增强人胃癌细胞顺铂敏感性的作用。

顺铂是胃癌化疗的基础用药，诱导细胞凋亡是其最主要的作用机制。本研究发现，较单用灯盏花素组，灯盏花素+顺铂联合给药干预能够有效提高BGC-823细胞细胞凋亡率。综上，灯盏花素具有增强人胃癌BGC-823细胞顺铂敏感性的药理学作用，其作用机制可能与调节凋亡相关基因表达有关。

参考文献

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